На рисунках 1.1—1.5 показан ряд пенициллинов, полученных из 6-АПК сотрудниками фирмы «Бичэм» в 1959—1970 гг. Кроме того, здесь указаны их наиболее интересные антибактериальные свойства. В последующие периоды после 1970 г. был достигнут дальнейший прогресс, который хотя и не был столь значительным, как первоначальные успехи, тем не менее имел свое значение. Здесь следует упомянуть о разработке так называемых резервных форм некоторых наиболее активных пенициллинов.
При таком: подходе цефалоспорины, очевидно, будут необходимы на обеих стадиях. Указанный принцип оправдан и при применении некоторых других антибиотиков, хотя в каждом таком случае надежд на успех остается все меньше.
Анализ большого числа типов химических структур микробных метаболитов, обладающих антимикробной активностью, показывает, что мы пока еще совершенно не в состоянии предсказать специфическую антимикробную активность и фармакологические свойства веществ путем выяснения их химической структуры [1].
Разработка проблемы синергизма началась в начале 40-х годов-с исследования антитуберкулезных препаратов, когда в отделе химиотерапии научно-исследовательской лаборатории «Велком» в Бекингеме под руководством Браунли и Башби решались вопросы кишечной антисептики в области ветеринарной химиотерапии. Исследования противотуберкулезных препаратов позднее были продолжены на морских свинках [44], и установлен синергизм между стрептомицином и сульфоном (сульфетрон) [45].
Вслед за этой первой работой по применению пенициллина были предприняты попытки лечения рожи стрептомицином [253, 254]. В последней из указанных статей описано испытание комбинации пеницил-лин4-стрептомицин на мышах, зараженных Е. rhusiopathiae в 5%-ном муцине. Полученные результаты, выраженные в процентах выживания по дням (табл. 3.1), являются примером синергидного
Таблица 3.1. Синергизм между пенициллином и стрептомицином.
В противоположность этому, рецензируя книгу Франклина и Сноу [95], Мак Лахлан отметил сомнительность старого представления о том, что регулярная смена лекарства не более безопасна,
чем увеличение его дозировки. Это мнение поддерживает и Гридней, который утверждал, что [109] «широкое использование комбинации лекарств в химиотерапии паразитарных болезней основано на трех основных концепциях. Согласно первой из них, большинство препаратов весьма селективно и обладает слабой токсичностью для организма-хозяина.
Тем не менее даже после длительной терапии в течение нескольких месяцев пациенты, как правило, представляют собой значительный резервуар Р+-форм. То же самое наблюдается у телят, выращиваемых в условиях постоянного контакта с антибиотиками. У них можно обнаружить от 40 до 60 % штаммов Е. coli, несущих R-фактор. В то же время телята на пастбищах, удаленных на 50 км от стационара, получавшие антибиотики только эпизодически, содержали менее 1 % Р+-форм Е.
Хорошим примером в
этом плане являются цефалоспорины — важная группа антибиотиков, основным недостатком которых является чувствительность наиболее активных из них к разрушающему действию ферментов эитеропатогенных бактерий. Защита этих антибиотиков от деградации ферментами будет, конечно, способствовать сохранению присущей им активности и значительно увеличит терапевтический потенциал. Одна из возможностей обеспечения такой защиты состоит в одновременном действии на бактерии и других р-лактамных антибиотиков, которые характеризуются значительно большим сродством к разрушающему их ферменту; например, использование против Pseudomonas высоких концентраций клоксациллина, который сам по себе неактивен против этих бактерий, но обладает очень высоким сродством к р-лактамазе Pseudomonas.
Ограниченное применение-таких сочетаний препаратов только при инфекциях мочевого тракта обусловлено тем, что необходимы очень высокие концентрации ингибирующего вещества.
В нашей работе мы предприняли попытку рассмотреть потенциальные возможности таких комбинаций, использовав для этого механическую модель мочевого тракта, на которой были испытаны разные схемы лечения [7]. При регулярном опорожнении «мочевого пузыря» у этой механической модели происходит быстрое уменьшение концентрации бактерий в зараженном «мочевом пузыре», которая затем устанавливается на колеблющемся уровне в пределах 106—107 микроорганизмов в одном миллилитре, как у большинства пациентов в клинике.
Упомянутый метод нашел широкое применение.
Увеличение бактерицидной активности
ТМП и сульфонамиды проявляют бактерицидную активность in vitro, однако для этого необходимы строго определенные условия. Об увеличенной бактерицидной активности при совместном применении лекарственных препаратов сообщал ряд авторов [11, 19, 24, 26, 31, 39, 83].
Гибель микроорганизмов при комбинированном или раздельном применении этих препаратов происходит в результате ненормального роста, когда клетки лишаются тимидина, а все остальные условия допускают продолжение белкового синтеза [4,93].
Известны результаты лишь нескольких опубликованных работ, в которых сравнивали эффективность ТМП, взятого отдельно и в комбинации с СМЗ. Небольшое число пациентов в каждом исследовании, а также нестандартная дозировка препарата не позволяют провести четкого сравнения, однако эти исследования показали, что терапевтическая эффективность одного ТМП мало отличается от эффективности комбинации его с сульфонамидом.
е. что конечная точка при определении МИК частично зависит от способности бактерий адаптироваться в процессе определения к другим ингибирующим воздействиям препарата), наводит на мысль, что взаимно дополняющее друг друга влияние препаратов на временные фенотипические изменения, бактерий может быть важным свойством общего синергидного действия. Специфическое усиление действия ТМП, которое хотя и определяется первоначальным биохимическим действием СМЗ на тот же метаболический путь, может .
Наиболее важным антагонистом низина является низиназа — специфический индуцируемый фермент, встречающийся у различных бактерий и их спор (включая молочнокислые бактерии, микрококки и др.). Подробно изучается низиназа В. cereus [19]. Установлена исключительно высокая корреляция между резистентностью спор к низину и интенсивностью образования низиназы; споры М-типа оказались более чувствительными к низину, так как мало образуют низиназы, тогда как споры Л-типа более резистентны к низину вследствие активной выработки фермента.
Опыты, проведенные в СССР, составляют свыше миллиона образцов молока, полученного на трех фермах. В полупроизводственных опытах стерилизованное и ароматизированное шоколадное молоко, зараженное естественным путем или споро-образующими бактериями (В. subtilis и В. stearothermophilus) и содержащее 10—100 ИЕ/мл низина, было изготовлено при —16 °С вместо обычных —13 "С. Оба типа обработанного низином молока не свертывались при хранении в течение 6 месяцев при 37 °С или
3 недель при 55 °С.
Только в одном сообщении компании «Финдус» говорилось о том, что умеренная тепловая обработка в присутствии низина не улучшает органолептические свойства зеленого горошка из-за потери аромата, хотя прокисание продукта удается контролировать. Более того, низин при существующей на него цене в этом случае оказался экономически невыгодным [24]. Имеются лишь единичные сообщения об эффективности использования низина после умеренного нагревания моркови с зеленым горошком, морковного пюре для детского питания, свеклы, сладкого корня, полусырого картофеля, спаржи и шпината [104, 130, 151].
Добавление низина позволяет снизить примерно на 45 % температуру нагревания говяжьих языков и пасты для бутербродов, изготовленной из птичьего или другого мяса, рыбы, крабов. В концентрации 80 ИЕ/г низин исключительно эффективен при консервировании грибов [147, 151].
Особый случай представляет икра, консервирование которой нужно проводить при очень мягком нагревании. Так, при добавлении 0,5 % низина и 5 % соли после пастеризации при 60 °С в продолжение 120 мин она сохранялась 12 месяцев при температуре от —2° до 4 °С, тогда как образцы без низина за это время подвергались порче [149].
По большинству культуральиых свойств продуцирующие низин штаммы Str. lactis не отличаются от других молочнокислых стрептококков, за исключением довольно низкой скорости, образования ими молочной кислоты. Низин оказывает эффективное бактерио-статическое и (или) бактерицидное действие на клостридий, выделенные из заплесневевшего сыра и, к несчастью, на бактерии в обычных заквасках, относящиеся к грамположительным микроорганизмам.
Размеры их клеток становились больше, чем у родительских штаммов [78, 79].
Резистентные к низину стрептококки не отличались от родительских форм по большинству культуральных свойств, учитываемых при физиологической классификации бактерий, за исключе-
нием низкой резистентности к таким неблагоприятным факторам, как повышенная температура и высокая концентрация желчи. При выращивании на одной и той же среде они имели более продолжительную лаг-фазу и давали меньше биомассы, чем чувствительные родительские штаммы.
300 мл триптозно-соевого отвара засевали стандартной дозой соответствующего штамма.
Перед этим по 250 мл среды в 500-миллилитровых колбах для встряхивания автоклавировали в течение 15 мин при 1 атм. Затем к 50 мл охлажденной автоклавированной среды добавляли соответствующее количество метабисульфита калия (аналар) и полученный раствор фильтровали через мембранный фильтр Сарто-риус с размером пор 0,45 мкм, имеющий префильтр из стеклянной ваты.
У штаммов G100 и G104 добавление бикарбоната медленно снижало скорость роста по сравнению с контролем, а стационарная фаза наступала позже и характеризовалась более высокими значениями оптической плотности, чем в контроле.
Как правило, в пробах с бикарбонатом рост М. thermosphactum спустя 24 ч, судя по величинам оптической плотности, происходил более медленно, чем в контроле.
Добавление бикарбоната в пробы, содержащие SQ2 в концентрации 450 мг/л, подавляло рост микроорганизмов, тогда как
одна двуокись серы в этой концентрации обладала очень слабым действием (рис.
coli и Aeromonas) после воздействия на них нипагина-М (метил/параоксибензоата) или окситетрациклина, а также одного штамма дрожжей (Hansenula beyerinckii CBS2561) после контакта с нистатином. 1
Инокулят готовили следующим образом: клетки в лог-фазе роста на триптозном агаре с соевым пептоном (бактерии) или на декстрозном агаре, содержащем дрожжевой экстракт (дрожжи), суспендировали в сорбит-фосфатном растворе (2,8 % масса/ объем сорбита в 0,1 М фосфатном буфере рН 6,0).
е. заболевания, в возникновении которых бактерии играют важную роль.
В некоторых ежемесячных сообщениях отдела ветеринарных исследований за 1975 г. и первую половину 1976 г. говорилось о доминирующей роли отдельных заболеваний. Речь шла о салмо-неллезе, маститах, пневмонии, абортах у коров, заболеваниях, вызванных Erysipelothrix rhusiophathiae, пастереллезе и пситак-козе. Хотя пситаккозы, как зоонозы, выделены отдельно, в сообщениях говорилось о том, что некоторые инфекции оказывают постоянное влияние на получение животноводческой продукции.
Поэтому антибиотики могут оставаться единственным средством поддержания продуктивности и прибыльности многих хозяйств.
С точки зрения ветеринарии лечебное применение антибактериальных препаратов, вероятно, никогда не будет заменено системами содержания скота, исключающими возникновение заболеваний животных. В настоящее время имеются существенные достижения в деле профилактики и лечения различных заболеваний, однако нельзя думать, что те средства, которые есть или могут появиться, окажутся полностью эффективными и применимыми в каждом случае.
Мы также согласны с тем, что, признавая необходимость лечебного применения антибиотиков, следует больше внимания обращать на возможные другие пути изменения микрофлоры в окружающей животных среде и «что необходимо изучить влияние более высоких гигиенических стандартов и других средств на экологию бактерий».
Поэтому на практике ветеринары несут двойную ответственность. Мы отдаем себе отчет в том, что существует постоянная необходимость в разработке и определении дальнейших программ предотвращения и борьбы с болезнями, особенно когда наши сведения по эпизоотологии и ситуации в хозяйствах позволяют сделать это.
Скорее всего применение комбинации связано с относительно более широким спектром активности, что расширяет диапазон профилактического действия и позволяет использовать ее в ситуации, когда природа инфекционного агента не установлена или установлена неточно, хотя предел активности комбинированного препарата может составлять лишь часть синергидной активности сочетаемых веществ.
Механизм действия антибиотиков может определять тип лечения.
Вопросы терапии в период лактации недавно были рассмотрены в другом обзоре [37], где авторы указали на оптимизм первых лет применения препаратов, которые вызвали смену бактериальной флоры, на возникновение проблемы остатков антибиотиков и переменные успехи многих специалистов при профилактике бактериальных инфекций у животных.
Некоторые из этих вопросов будут нами рассмотрены более подробно, учитывая значение терапии в период лактации.
После выхода в свет правительственной Белой книги в 1963 г. Грин и др. [13] в 1967 г. по поручению Управления по торговле молоком в Англии провели обследование; ситуация в стране, по их данным, имела определенный прогресс в решении этой проблемы. Так, установленный уровень остатков пенициллина в молоке в пределах 0,05 ИЕ/мл или выше в Англии и Уэльсе снизился с 6% в 1961 г. до 1,5% в 1966 г.; в Северной Ирландии при этом же уровне он упал до менее чем 2% в 1966 г.
По вопросу терапии в периоды лактации и сухостоя в наших знаниях и практических навыках пока еще имеются очень существенные пробелы. В результате применения указанной схемы лечения маститов ветеринары стали плохими диагностами. Возможно, это связано с экономическими причинами, которые ограничивают объем лабораторных исследований, и все же для преодоления сложившейся ситуации необходимо изыскать такие подходы, которые позволили бы клиницистам применять лекарства более селективно.
В этом процессе могут участвовать и другие микроорганизмы, но менее часто». До сегодняшнего дня ситуация в основном не изменилась. В последнее время большее внимание стали уделять инфекциям, вызванным грамположительными бактериями. Эти бактерии попадают в организм животного из окружающей среды и, по-видимому, определяют эпизоотологическую ситуацию, которая зависит от системы содержания скота, гигиенических мероприятий и применения антибиотиков.
В этой главе сделана попытка кратко изложить суть метода, который мы применяем в Северной Ирландии для определения остатков антибиотиков в тканях животных, а также будет рассмотрена эффективность и чувствительность этого метода. Речь пойдет об антибиотиках, наиболее широко применяемых в животноводстве в Северной Ирландии, а именно о пенициллине, ампициллине, не-омицине и окситетрациклине, которые определяются микробиологическим методом.
Нидерландский метод очень прост, и для его применения требуются только диски фильтровальной бумаги и кусочек почки. Диск вкладывают в надрез образца почки и через 2 ч вынимают. Затем его кладут на поверхность засеянного тест-культурой агара, инкубируют ночь и измеряют образовавшиеся зоны. Результаты такого сравнения приведены в таблице 18.6.
Таблица 18.6. Количество образцов, содержащих остатки антибиотиков *
Методом 1 остатки антибиотиков были обнаружены во всех почках, тогда как при использовании метода 2 положительными оказались 3 из 6 образцов почек после введения телятам пенициллина, 4 из 6 после введения ампициллина и 1 из 6 после введения окситетрациклина.
После завершения периода включения меченой аминокислоты в протоплазматические белки микроорганизмы тщательно отмывали изотоническим физраствором и инкубировали в нем в течение 5 ч при 37 °С с катионными белками. Через определенные промежутки времени из инкубационной смеси отбирали пробы, а стафилококки осаждали центрифугированием. Все вытекшие из микроорганизмов меченые белки осаждали из бесклеточной надосадочной жидкости добавлением трихлоруксус-ной кислоты, растворяли и подсчитывали радиоактивность в жидкостном сцинтилляционном счетчике.
Способность вымени стимулировать антимикробные свойства сыворотки крови может способствовать повышению антимикробной активности сывороточных компонентов при воспалительной реакции. Скорость, с которой компоненты сыворотки крови поступают из общей циркуляции в секрецию молочной железы на ранних стадиях инфекции, требует дальнейшего изучения, так как именно она может определять чувствительность и резистентность животных к маститам.
В 6 из этих опытов у животных отмечен ежедневный прирост массы тела, а во всех 8 опытах он составил в среднем 3,3 %• Эффективность, с которой обработанное зерно обеспечивает прирост массы тела скота, в среднем оказалась на 6,5 % выше, чем при скармливании сухого зерна. Для объяснения этого явления выдвинут ряд причин: увеличение поедаемости обработанного зерна, увеличение энергетического потенциала за счет добавления кислоты и улучшение текстуры обработанного зерна.
Получены данные о том, что Bacteroid.es sp. из кишечника оказывает интерферирующее действие на передачу резистентности главным образом за счет выделения продуктов, ингибирующих конъюгацию бактерий [4]. Поэтому неодинаковая микрофлора кишечника у разных видов животных может & разной степени влиять на возможность ПРЛ.
Из приведенных данных можно заключить, что ПРЛ в нормальном кишечнике отмечается редко, но может встречаться более регулярно при некоторых условиях, например в присутствии антибиотиков [51].
Наибольшее влияние на микрофлору кала оказывает пероральное введение таких антибиотиков, которые плохо абсорбируются в верхней части желудочно-кишечного тракта. Например, у людей пероральное введение тетрациклина, который не полностью абсорбируется из пищеварительного тракта [62], приводит к увеличению резистентных к этому антибиотику бактерий в микрофлоре кала [19, 35, 41, 49, 58, 102]. Кроме того, введение субтерапевтических доз приводит к селекции резистентных штаммов Е.
colt человека и животных, а также микрофлоры кишечника животного и микрофлоры туши по обеим характеристикам. Таким способом были идентифицированы различные виды животных, составляющие потенциальный резервуар резистентных штаммов Е. coli для человека. На основании полученных данных удалось провести сравнение ситуации по резистентным штаммам среди людей и животных [37].
Идентификация резервуара микроорганизмов-у животных.
Присутствие резистентных к антибиотикам штаммов Е. coli
в кишечнике животных и на туше не говорит об их идентичности. В вышеуказанных сообщениях говорилось о том, что загрязнение туши может обусловливаться бактериями из содержимого кишечника, хотя это не столь очевидно. Мы попытались изучить эту взаимосвязь, используя множественный характер резистентности к антибиотикам и О-серотипы. Для этого параллельно были исследованы образцы содержимого прямой кишки и мазки с разных участков туши крупного рогатого скота, овец, свиней и телят (табл.
coli или 5. typhimurium, причем до того, как были даны корм и питье. Позднее Смит [24] показал передачу Р+-фактора эпидемической формы в организме цыплят с обычной микрофлорой пищеварительного тракта. Для этого культуры Е. coli R+ включали в питьевую воду группы цыплят в первые три дня их жизни. На 4-й день перорально им ввели слабочувст-вптельную к антибиотикам решшиентную культуру 5. typhimurium.
При таком: подходе цефалоспорины, очевидно, будут необходимы на обеих стадиях. Указанный принцип оправдан и при применении некоторых других антибиотиков, хотя в каждом таком случае надежд на успех остается все меньше.
Анализ большого числа типов химических структур микробных метаболитов, обладающих антимикробной активностью, показывает, что мы пока еще совершенно не в состоянии предсказать специфическую антимикробную активность и фармакологические свойства веществ путем выяснения их химической структуры [1].
Разработка проблемы синергизма началась в начале 40-х годов-с исследования антитуберкулезных препаратов, когда в отделе химиотерапии научно-исследовательской лаборатории «Велком» в Бекингеме под руководством Браунли и Башби решались вопросы кишечной антисептики в области ветеринарной химиотерапии. Исследования противотуберкулезных препаратов позднее были продолжены на морских свинках [44], и установлен синергизм между стрептомицином и сульфоном (сульфетрон) [45].
Вслед за этой первой работой по применению пенициллина были предприняты попытки лечения рожи стрептомицином [253, 254]. В последней из указанных статей описано испытание комбинации пеницил-лин4-стрептомицин на мышах, зараженных Е. rhusiopathiae в 5%-ном муцине. Полученные результаты, выраженные в процентах выживания по дням (табл. 3.1), являются примером синергидного
Таблица 3.1. Синергизм между пенициллином и стрептомицином.
В противоположность этому, рецензируя книгу Франклина и Сноу [95], Мак Лахлан отметил сомнительность старого представления о том, что регулярная смена лекарства не более безопасна,
чем увеличение его дозировки. Это мнение поддерживает и Гридней, который утверждал, что [109] «широкое использование комбинации лекарств в химиотерапии паразитарных болезней основано на трех основных концепциях. Согласно первой из них, большинство препаратов весьма селективно и обладает слабой токсичностью для организма-хозяина.
Тем не менее даже после длительной терапии в течение нескольких месяцев пациенты, как правило, представляют собой значительный резервуар Р+-форм. То же самое наблюдается у телят, выращиваемых в условиях постоянного контакта с антибиотиками. У них можно обнаружить от 40 до 60 % штаммов Е. coli, несущих R-фактор. В то же время телята на пастбищах, удаленных на 50 км от стационара, получавшие антибиотики только эпизодически, содержали менее 1 % Р+-форм Е.
Хорошим примером в
этом плане являются цефалоспорины — важная группа антибиотиков, основным недостатком которых является чувствительность наиболее активных из них к разрушающему действию ферментов эитеропатогенных бактерий. Защита этих антибиотиков от деградации ферментами будет, конечно, способствовать сохранению присущей им активности и значительно увеличит терапевтический потенциал. Одна из возможностей обеспечения такой защиты состоит в одновременном действии на бактерии и других р-лактамных антибиотиков, которые характеризуются значительно большим сродством к разрушающему их ферменту; например, использование против Pseudomonas высоких концентраций клоксациллина, который сам по себе неактивен против этих бактерий, но обладает очень высоким сродством к р-лактамазе Pseudomonas.
Ограниченное применение-таких сочетаний препаратов только при инфекциях мочевого тракта обусловлено тем, что необходимы очень высокие концентрации ингибирующего вещества.
В нашей работе мы предприняли попытку рассмотреть потенциальные возможности таких комбинаций, использовав для этого механическую модель мочевого тракта, на которой были испытаны разные схемы лечения [7]. При регулярном опорожнении «мочевого пузыря» у этой механической модели происходит быстрое уменьшение концентрации бактерий в зараженном «мочевом пузыре», которая затем устанавливается на колеблющемся уровне в пределах 106—107 микроорганизмов в одном миллилитре, как у большинства пациентов в клинике.
Упомянутый метод нашел широкое применение.
Увеличение бактерицидной активности
ТМП и сульфонамиды проявляют бактерицидную активность in vitro, однако для этого необходимы строго определенные условия. Об увеличенной бактерицидной активности при совместном применении лекарственных препаратов сообщал ряд авторов [11, 19, 24, 26, 31, 39, 83].
Гибель микроорганизмов при комбинированном или раздельном применении этих препаратов происходит в результате ненормального роста, когда клетки лишаются тимидина, а все остальные условия допускают продолжение белкового синтеза [4,93].
Известны результаты лишь нескольких опубликованных работ, в которых сравнивали эффективность ТМП, взятого отдельно и в комбинации с СМЗ. Небольшое число пациентов в каждом исследовании, а также нестандартная дозировка препарата не позволяют провести четкого сравнения, однако эти исследования показали, что терапевтическая эффективность одного ТМП мало отличается от эффективности комбинации его с сульфонамидом.
е. что конечная точка при определении МИК частично зависит от способности бактерий адаптироваться в процессе определения к другим ингибирующим воздействиям препарата), наводит на мысль, что взаимно дополняющее друг друга влияние препаратов на временные фенотипические изменения, бактерий может быть важным свойством общего синергидного действия. Специфическое усиление действия ТМП, которое хотя и определяется первоначальным биохимическим действием СМЗ на тот же метаболический путь, может .
Наиболее важным антагонистом низина является низиназа — специфический индуцируемый фермент, встречающийся у различных бактерий и их спор (включая молочнокислые бактерии, микрококки и др.). Подробно изучается низиназа В. cereus [19]. Установлена исключительно высокая корреляция между резистентностью спор к низину и интенсивностью образования низиназы; споры М-типа оказались более чувствительными к низину, так как мало образуют низиназы, тогда как споры Л-типа более резистентны к низину вследствие активной выработки фермента.
Опыты, проведенные в СССР, составляют свыше миллиона образцов молока, полученного на трех фермах. В полупроизводственных опытах стерилизованное и ароматизированное шоколадное молоко, зараженное естественным путем или споро-образующими бактериями (В. subtilis и В. stearothermophilus) и содержащее 10—100 ИЕ/мл низина, было изготовлено при —16 °С вместо обычных —13 "С. Оба типа обработанного низином молока не свертывались при хранении в течение 6 месяцев при 37 °С или
3 недель при 55 °С.
Только в одном сообщении компании «Финдус» говорилось о том, что умеренная тепловая обработка в присутствии низина не улучшает органолептические свойства зеленого горошка из-за потери аромата, хотя прокисание продукта удается контролировать. Более того, низин при существующей на него цене в этом случае оказался экономически невыгодным [24]. Имеются лишь единичные сообщения об эффективности использования низина после умеренного нагревания моркови с зеленым горошком, морковного пюре для детского питания, свеклы, сладкого корня, полусырого картофеля, спаржи и шпината [104, 130, 151].
Добавление низина позволяет снизить примерно на 45 % температуру нагревания говяжьих языков и пасты для бутербродов, изготовленной из птичьего или другого мяса, рыбы, крабов. В концентрации 80 ИЕ/г низин исключительно эффективен при консервировании грибов [147, 151].
Особый случай представляет икра, консервирование которой нужно проводить при очень мягком нагревании. Так, при добавлении 0,5 % низина и 5 % соли после пастеризации при 60 °С в продолжение 120 мин она сохранялась 12 месяцев при температуре от —2° до 4 °С, тогда как образцы без низина за это время подвергались порче [149].
По большинству культуральиых свойств продуцирующие низин штаммы Str. lactis не отличаются от других молочнокислых стрептококков, за исключением довольно низкой скорости, образования ими молочной кислоты. Низин оказывает эффективное бактерио-статическое и (или) бактерицидное действие на клостридий, выделенные из заплесневевшего сыра и, к несчастью, на бактерии в обычных заквасках, относящиеся к грамположительным микроорганизмам.
Размеры их клеток становились больше, чем у родительских штаммов [78, 79].
Резистентные к низину стрептококки не отличались от родительских форм по большинству культуральных свойств, учитываемых при физиологической классификации бактерий, за исключе-
нием низкой резистентности к таким неблагоприятным факторам, как повышенная температура и высокая концентрация желчи. При выращивании на одной и той же среде они имели более продолжительную лаг-фазу и давали меньше биомассы, чем чувствительные родительские штаммы.
300 мл триптозно-соевого отвара засевали стандартной дозой соответствующего штамма.
Перед этим по 250 мл среды в 500-миллилитровых колбах для встряхивания автоклавировали в течение 15 мин при 1 атм. Затем к 50 мл охлажденной автоклавированной среды добавляли соответствующее количество метабисульфита калия (аналар) и полученный раствор фильтровали через мембранный фильтр Сарто-риус с размером пор 0,45 мкм, имеющий префильтр из стеклянной ваты.
У штаммов G100 и G104 добавление бикарбоната медленно снижало скорость роста по сравнению с контролем, а стационарная фаза наступала позже и характеризовалась более высокими значениями оптической плотности, чем в контроле.
Как правило, в пробах с бикарбонатом рост М. thermosphactum спустя 24 ч, судя по величинам оптической плотности, происходил более медленно, чем в контроле.
Добавление бикарбоната в пробы, содержащие SQ2 в концентрации 450 мг/л, подавляло рост микроорганизмов, тогда как
одна двуокись серы в этой концентрации обладала очень слабым действием (рис.
coli и Aeromonas) после воздействия на них нипагина-М (метил/параоксибензоата) или окситетрациклина, а также одного штамма дрожжей (Hansenula beyerinckii CBS2561) после контакта с нистатином. 1
Инокулят готовили следующим образом: клетки в лог-фазе роста на триптозном агаре с соевым пептоном (бактерии) или на декстрозном агаре, содержащем дрожжевой экстракт (дрожжи), суспендировали в сорбит-фосфатном растворе (2,8 % масса/ объем сорбита в 0,1 М фосфатном буфере рН 6,0).
е. заболевания, в возникновении которых бактерии играют важную роль.
В некоторых ежемесячных сообщениях отдела ветеринарных исследований за 1975 г. и первую половину 1976 г. говорилось о доминирующей роли отдельных заболеваний. Речь шла о салмо-неллезе, маститах, пневмонии, абортах у коров, заболеваниях, вызванных Erysipelothrix rhusiophathiae, пастереллезе и пситак-козе. Хотя пситаккозы, как зоонозы, выделены отдельно, в сообщениях говорилось о том, что некоторые инфекции оказывают постоянное влияние на получение животноводческой продукции.
Поэтому антибиотики могут оставаться единственным средством поддержания продуктивности и прибыльности многих хозяйств.
С точки зрения ветеринарии лечебное применение антибактериальных препаратов, вероятно, никогда не будет заменено системами содержания скота, исключающими возникновение заболеваний животных. В настоящее время имеются существенные достижения в деле профилактики и лечения различных заболеваний, однако нельзя думать, что те средства, которые есть или могут появиться, окажутся полностью эффективными и применимыми в каждом случае.
Мы также согласны с тем, что, признавая необходимость лечебного применения антибиотиков, следует больше внимания обращать на возможные другие пути изменения микрофлоры в окружающей животных среде и «что необходимо изучить влияние более высоких гигиенических стандартов и других средств на экологию бактерий».
Поэтому на практике ветеринары несут двойную ответственность. Мы отдаем себе отчет в том, что существует постоянная необходимость в разработке и определении дальнейших программ предотвращения и борьбы с болезнями, особенно когда наши сведения по эпизоотологии и ситуации в хозяйствах позволяют сделать это.
Скорее всего применение комбинации связано с относительно более широким спектром активности, что расширяет диапазон профилактического действия и позволяет использовать ее в ситуации, когда природа инфекционного агента не установлена или установлена неточно, хотя предел активности комбинированного препарата может составлять лишь часть синергидной активности сочетаемых веществ.
Механизм действия антибиотиков может определять тип лечения.
Вопросы терапии в период лактации недавно были рассмотрены в другом обзоре [37], где авторы указали на оптимизм первых лет применения препаратов, которые вызвали смену бактериальной флоры, на возникновение проблемы остатков антибиотиков и переменные успехи многих специалистов при профилактике бактериальных инфекций у животных.
Некоторые из этих вопросов будут нами рассмотрены более подробно, учитывая значение терапии в период лактации.
После выхода в свет правительственной Белой книги в 1963 г. Грин и др. [13] в 1967 г. по поручению Управления по торговле молоком в Англии провели обследование; ситуация в стране, по их данным, имела определенный прогресс в решении этой проблемы. Так, установленный уровень остатков пенициллина в молоке в пределах 0,05 ИЕ/мл или выше в Англии и Уэльсе снизился с 6% в 1961 г. до 1,5% в 1966 г.; в Северной Ирландии при этом же уровне он упал до менее чем 2% в 1966 г.
По вопросу терапии в периоды лактации и сухостоя в наших знаниях и практических навыках пока еще имеются очень существенные пробелы. В результате применения указанной схемы лечения маститов ветеринары стали плохими диагностами. Возможно, это связано с экономическими причинами, которые ограничивают объем лабораторных исследований, и все же для преодоления сложившейся ситуации необходимо изыскать такие подходы, которые позволили бы клиницистам применять лекарства более селективно.
В этом процессе могут участвовать и другие микроорганизмы, но менее часто». До сегодняшнего дня ситуация в основном не изменилась. В последнее время большее внимание стали уделять инфекциям, вызванным грамположительными бактериями. Эти бактерии попадают в организм животного из окружающей среды и, по-видимому, определяют эпизоотологическую ситуацию, которая зависит от системы содержания скота, гигиенических мероприятий и применения антибиотиков.
В этой главе сделана попытка кратко изложить суть метода, который мы применяем в Северной Ирландии для определения остатков антибиотиков в тканях животных, а также будет рассмотрена эффективность и чувствительность этого метода. Речь пойдет об антибиотиках, наиболее широко применяемых в животноводстве в Северной Ирландии, а именно о пенициллине, ампициллине, не-омицине и окситетрациклине, которые определяются микробиологическим методом.
Нидерландский метод очень прост, и для его применения требуются только диски фильтровальной бумаги и кусочек почки. Диск вкладывают в надрез образца почки и через 2 ч вынимают. Затем его кладут на поверхность засеянного тест-культурой агара, инкубируют ночь и измеряют образовавшиеся зоны. Результаты такого сравнения приведены в таблице 18.6.
Таблица 18.6. Количество образцов, содержащих остатки антибиотиков *
Методом 1 остатки антибиотиков были обнаружены во всех почках, тогда как при использовании метода 2 положительными оказались 3 из 6 образцов почек после введения телятам пенициллина, 4 из 6 после введения ампициллина и 1 из 6 после введения окситетрациклина.
После завершения периода включения меченой аминокислоты в протоплазматические белки микроорганизмы тщательно отмывали изотоническим физраствором и инкубировали в нем в течение 5 ч при 37 °С с катионными белками. Через определенные промежутки времени из инкубационной смеси отбирали пробы, а стафилококки осаждали центрифугированием. Все вытекшие из микроорганизмов меченые белки осаждали из бесклеточной надосадочной жидкости добавлением трихлоруксус-ной кислоты, растворяли и подсчитывали радиоактивность в жидкостном сцинтилляционном счетчике.
Способность вымени стимулировать антимикробные свойства сыворотки крови может способствовать повышению антимикробной активности сывороточных компонентов при воспалительной реакции. Скорость, с которой компоненты сыворотки крови поступают из общей циркуляции в секрецию молочной железы на ранних стадиях инфекции, требует дальнейшего изучения, так как именно она может определять чувствительность и резистентность животных к маститам.
В 6 из этих опытов у животных отмечен ежедневный прирост массы тела, а во всех 8 опытах он составил в среднем 3,3 %• Эффективность, с которой обработанное зерно обеспечивает прирост массы тела скота, в среднем оказалась на 6,5 % выше, чем при скармливании сухого зерна. Для объяснения этого явления выдвинут ряд причин: увеличение поедаемости обработанного зерна, увеличение энергетического потенциала за счет добавления кислоты и улучшение текстуры обработанного зерна.
Получены данные о том, что Bacteroid.es sp. из кишечника оказывает интерферирующее действие на передачу резистентности главным образом за счет выделения продуктов, ингибирующих конъюгацию бактерий [4]. Поэтому неодинаковая микрофлора кишечника у разных видов животных может & разной степени влиять на возможность ПРЛ.
Из приведенных данных можно заключить, что ПРЛ в нормальном кишечнике отмечается редко, но может встречаться более регулярно при некоторых условиях, например в присутствии антибиотиков [51].
Наибольшее влияние на микрофлору кала оказывает пероральное введение таких антибиотиков, которые плохо абсорбируются в верхней части желудочно-кишечного тракта. Например, у людей пероральное введение тетрациклина, который не полностью абсорбируется из пищеварительного тракта [62], приводит к увеличению резистентных к этому антибиотику бактерий в микрофлоре кала [19, 35, 41, 49, 58, 102]. Кроме того, введение субтерапевтических доз приводит к селекции резистентных штаммов Е.
colt человека и животных, а также микрофлоры кишечника животного и микрофлоры туши по обеим характеристикам. Таким способом были идентифицированы различные виды животных, составляющие потенциальный резервуар резистентных штаммов Е. coli для человека. На основании полученных данных удалось провести сравнение ситуации по резистентным штаммам среди людей и животных [37].
Идентификация резервуара микроорганизмов-у животных.
Присутствие резистентных к антибиотикам штаммов Е. coli
в кишечнике животных и на туше не говорит об их идентичности. В вышеуказанных сообщениях говорилось о том, что загрязнение туши может обусловливаться бактериями из содержимого кишечника, хотя это не столь очевидно. Мы попытались изучить эту взаимосвязь, используя множественный характер резистентности к антибиотикам и О-серотипы. Для этого параллельно были исследованы образцы содержимого прямой кишки и мазки с разных участков туши крупного рогатого скота, овец, свиней и телят (табл.
coli или 5. typhimurium, причем до того, как были даны корм и питье. Позднее Смит [24] показал передачу Р+-фактора эпидемической формы в организме цыплят с обычной микрофлорой пищеварительного тракта. Для этого культуры Е. coli R+ включали в питьевую воду группы цыплят в первые три дня их жизни. На 4-й день перорально им ввели слабочувст-вптельную к антибиотикам решшиентную культуру 5. typhimurium.