Но как учесть действие отдельных препаратов в составе парных или множественных комбинаций?
Степень бактерицидного действия может быть оценена так, как это предложили Джевитс и др. [136]. Мы можем подтвердить, что в случае синергизма справедливы три положения, высказанные Дэвисом и Севагом [71]:
1) концентрация комбинированного препарата должна быть ниже ингибирующей концентрации каждого из входящих в него веществ;
2) концентрация каждого препарата в комбинации никогда не должна быть выше ингибирующей концентрации каждого из них в отдельности;
3) в присутствии комбинации разных веществ развитие выживших микроорганизмов должно происходить независимо от того, содержат они или нет резистентную популяцию (и причем не за короткое время).
Рассматривая современное состояние вопроса, по-видимому, следует сделать очень краткий обзор результатов применения парных препаратов, иногда называемых как синергид-ные комбинации, которые в действительности являются дополняющими друг друга и использовались в различных целях.
Простейшей и наверняка наименее синергидной является комплементация двух антибиотиков, которая в половинной от МИК каждого препарата концентрации оказывает такое же действие, как ингибирующая концентрация каждого из них по отдельности.
Совместное применение этих препаратов исключительно эффективно уничтожает всю или почти всю огромную популяцию энтерококков. Причина состоит в том, что стрептомицин, потенциально летальный для микроорганизмов, не проявляет своего максимального действия, так как может быть отделен от своей мишени на рибосоме стрептококков относительно непроницаемой клеточной стенкой. При одновременном действии на бактерию стрептомицина и пенициллина клеточная стенка разрушается и стрептомицин получает возможность проникать внутрь клетки и проявить свое летальное действие.
для обоих препаратов, соответствует такому соотношению, при котором препараты присутствуют в пропорции, отвечающей их индивидуальным М.ИК, определенным по отдельности [1, 20]. Например, если МИК ТМП составляет 1 мкг/мл, а СМЗ — 20 мкг/мл, то оптимальное соотношение будет 1 : 20, но вследствие широкой вариабельности в чувствительности микроорганизмов к ТМП и СМЗ указанное оптимальное соотношение также непостоянно.
Механизм синергизма между пенициллинами и аминогликозидами неизвестен. Он может состоять в увеличении проникновения аминогликозидов в бактериальную клетку в присутствии пенициллина, который ингибирует синтез клеточной стенки, как это было предложено при объяснении действия комбинации пенн-циллин-г-аминогликозиды на энтерококки. Однако независимо от возможного механизма имеющиеся данные показывают, что комбинированное лечение может значительно повысить эффективность антибиотикотерапии инфекций, вызванных Ps.
Пока непонятно клиническое значение взаимодействия мециллинама с другими р-лактамными антибиотиками, однако установленное в лаборатории явление представляет значительный интерес.
Совершенно другим примером синергизма с участием пенициллинов, для которого механизм представляется совершенно ясным, является синергизм при конкурентном ингибировании 6-лактамаз. Указанный тип синергизма может быть продемонстрирован между парой р-лактамных антибиотиков.
Также широко распространено использование комбинаций карбенициллина и аминогликозидов для лечения инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями, в частности Ps. aeruginosa. Связано это с синергидным эффектом, который можно показать in vitro, что значительно труднее получить в клинических условиях. Применение в клинике р-лактамазных ингибиторов пока ограничено, хотя очевидно, что правильное использование этого принципа для получения синергидного эффекта при применении В-лактамных антибиотиков имеет большое клиническое значение.
Как микробиолог-специалист по производству сыра, в дальнейшем я буду рассматривать проблемы консервации продуктов только с точки зрения применения низина.
Структура и физико-химические свойства. Строение низина и его биосинтез бактериями были изучены в последнее десятилетие с помощью современных методов молекулярной биологии. Эти работы позволили глубже понять его состав и структуру [32, 33, 34, 35].
Действие низина зависит также от количества спор в среде.
споры от клетки; г — дальнейший рост вегетативной клетки; д — деление клетки.
В этой связи следует подчеркнуть важность поддержания необходимого уровня низина в системе при исследовании чувствительности спор к этому антибиотику. Низин не способен к прочному связыванию со спорами [147], однако по этому вопросу существует и противоположное мнение [124].
Определение ростовых факторов, стимулирующих биосинтез низина, было проведено на дешевой культу-ральной среде с сывороткой. Изучена также возможность использования панкреатиновых гидролизатов — отходов инсулинового производства, а также пепсиновых гидролизатов молочнокислых бактерий [3, 4, 5, 6, 7, 20, 21, 23, 105, 107, 133, 142].
Имеется ряд публикаций по получению и характеристике препаратов низина.
helveticus) или без резкого увеличения выработки низиназы (например, Str. thermophilus) до исключительно легкого получения заквасок из мезофильных бактерий.
Отобранные резистентные-к низину штаммы (два штамма Str. lactis, один Str. cremoris, один Str. diacetilactis, один L. casei и два Propionibacterium) вначале были испытаны в качестве закваски в полупроизводственных условиях.
Резистентными к низину считали такие штаммы, которые имели ряд свойств, существенных для последующего использования: а) способность к кислотообразованию (аналогично родительскому штамму) при содержании в среде около 300 ИЕ/мл низина; б) резистентность к низину в течение более чем 1 месяца; в) неспособность синтезировать низиназу.
Очевидно, есть смысл продолжить наблюдения за стрессовым действием голодания.
Хотя действие голодания приводит к восстанавливаемым повреждениям, однако систематическое изучение повреждений и гибели от
голодания не привело к однозначным результатам. Обладает ли вторичное воздействие защитной способностью или ускоряет гибель культуры от голодания, может определяться природой субстрата, лимитирующего рост данной культуры.
На рисунке 11.1 приведена зависимость между концентрацией свободной S02 и поглощением при оптимальной длине волны (620нм). Чтобы получить прозрачную надосадочную жидкость для определения в ней содержания SO2, клетки в конце лаг-фазы необходимо осадить центрифугированием.
Измерение рН производили с помощью стеклянного электрода рН-метра Пай-Уникам, который опускали в образцы среды, отобранные с образцами для измерения мутности.
Сделанные ими выводы об эффективности пенициллина зависели от частоты заболевания, величины стада и конкретной национальной политики в области профилактики заболеваний. Исследования, проведенные в Национальном институте племенного молочного скота в Центральной ветеринарной лаборатории в Англии в течение 60-х годов, а также в Корнелльском университете США, завершились серией статей, в которых была изложена программа профилактики маститов.
В то же время коммерческая необходимость в быстром восстановлении здоровья зараженного животного и его доли в продуктивности всего стада не допускает промедления в проведении лечебных мероприятий. Примером таких обстоятельств является выбраковка высокопродуктивных дойных коров при остром мастите.
Отсутствие клинических признаков не позволяет идентифицировать инфицирующий микроорганизм, хотя маститы подобного типа могут быть результатом заражения одной или несколькими разновидностями грамположительных или грамотрицательных бактерий.
Результаты лечения, полученные в одном хозяйстве, могут иметь критическое значение для распространения курса лечения на другие хозяйства, особенно при колибациллезе у телят, когда в течение интенсивного периода отела в зимний и весенний период чувствительность резистентных патогенов к антибиотику может варьировать еженедельно, о чем говорит регулярное определение чувствительности к антибиотикам.
Несмотря на постоянное требование ввести антибиотикотера-пию после первоначального обследования заболевшего животного, тем не менее ветеринарные практики хорошо понимают значение й необходимость тестов на чувствительность к антибиотикам.
Чувствительность постоянных и внесенных извне серо-типов Е. coli в этих условиях может изменяться настолько часто и так быстро, что любое подозрение на начало ухудшения клинической картины при новой вспышке должно указать на необходимость дополнительных тестов на чувствительность, чтобы предотвратить серьезные потери.
Периодические лабораторные исследования образцов от животных, нуждающихся в лечении, или образцов после вскрытия не указывают, что резистентность обнаруживаемых в хозяйствах патогенов не поддается воздействию доступными антибиотиками.
Мы рассматриваем антибиотики как слабую, но необходимую замену профилактики и хорошего содержания животных, хотя применяемые препараты никогда не исключают необходимости как профилактики, так и удовлетворительного содержания. Можно надеяться, что длительное применение антибиотиков не вызовет сомнения в их надобности, а их потенциальная вредность для людей и животных уменьшится, если антибактериальные вещества будут использоваться с ограничениями и под надежным контролем.
ИЗМЕНЕНИЕ СВОЙСТВ МИКРОФЛОРЫ ПОСЛЕ ПРОВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКОТЕРАПИИ
Как указано в обзоре Вилсона [48], в Англии в течение последних 6 лет отмечено увеличение у крупного рогатого скота резистентных к пенициллину стафилококков от 40 до 70 %. В Северной Ирландии на протяжении 10 лет мы проводили ежегодное тестирование по 500 изолятов и установили, что устойчивые к пенициллину стафилококки составляют от 80 до 90%.
Проблема слишком велика, и я намеренно избегал обсуждения преимуществ одного конкретного антибиотика против другого, учитывая их большое разнообразие и доступность. Сказанное справедливо и для проблемы осложнений, возникающих при оценке комбинаций лекарств, их дозировки и влияния лекарственных форм.
Определенное мнение, видимо, стоит высказать относительно' антибиотиков, которые легко связываются с тканями организма и белком.
Полевые опыты на большом числе крупного рогатого скота и свиней показывают [6], что применение комбинации триметоприма и сульфонамидов дает лучшие результаты, чем использование в повышенной дозировке одного сульфонамида; но поскольку триметоприм индивидуально испытан не был, то обнадеживающие результаты от применения комбинации препаратов могли быть отнесены за счет активности триметоприма. В связи с этим была предпринята попытка разработать экспериментальную модель инфекции скота штаммом Salmonella dublin, чтобы в контролируемых условиях эксперимента in vitro изучить явление синергизма между препаратами.
Уменьшилось количество случаев новых инфекций и маститов при отеле.
Результаты испытания опытных мазей, содержащих цефалоспорины, показали, что эти антибиотики имеют большое значение при лечении маститов. Кроме того, цефалоспориновые мази полностью отвечают требованиям, предъявляемым к интрацистернальным препаратам. Оба препарата были активны in vivo и in vitro против микроорганизмов, вызывающих маститы; они накапливаются в вымени в оптимальных концентрациях и удерживаются там достаточно долго.
Теперь мы получили возможность широкого выбора мазей с антибиотиками для лечения и предотвращения заболевания. По-видимому, следующим объектом нашего внимания должен стать вопрос: как наиболее оптимально применять эти препараты? Анти-биотикотерапия может приобрести особое значение при применении ее в условиях тщательной гигиены и соответствующей организации производства. В этих случаях антибиотики могут стать даже наиболее предпочтительным средством для профилактики маститов.
При анализе образцов кала от коров, которым скармливали цинк-бацитрацин, не было установлено различий в количестве высевающихся Е. coli из опытного и контрольного образцов. Штаммы Е. coli культивировали затем на агаре с цинк-бацитрацином и инкубировали в аэробных условиях в течение ночи при 37 °С. После негативного контрастирования бактерии исследовали методом электронной микроскопии. На агаровой среде без цинк-бацитра-цина клетки Е.
Ясно, что несостоятельность определения аддитивности, которое мы исследовали, вызвана тем обстоятельством, что основные кривые не являются прямолинейными. Более того, мы можем сказать, что обоснованное определение аддитивности можно дать лишь в том случае, если основные кривые будут иметь форму прямых линий. Одна из двух переменных, по которым строятся основные кривые, а именно та, которая строится по точкам на горизонтальной оси, соответствует массе используемого компонента.
Для каждой из пяти возможностей по нашему первому методу сравнения можно показать, что определения аддитивности, антагонизма и синергизма справедливы лишь при двух условиях, которые состоят в следующем.
1. Наибольшая из максимальных потенциальных активностей, достигаемая тремя конкурирующими веществами (двумя индивидуальными компонентами и их смесью), выбирается как стандартная.
2. Для препарата, будь это простой компонент или смесь, который никогда не достигает стандартной потенциальной активности, количество вещества, эквивалентное одной стоп-дозе, считается не установленным.
Затем на агар накладывали 4 диска одного и того же антибиотика с одинаковой концентрацией; на обратной стороне дисков наносили метку (рис. 24.3). Диски оставляли для равномерной диффузии
антибиотика в агар. Таким методом можно оценить максимум четыре комбинированных препарата в одной чашке.
К следующим 9 мл расплавленного агара при 48 °С добавляли 1 мл культуры Е. coli, перемешивали до гомогенного состояния и выливали в чашку, которую затем охлаждали.
24.3). Если «в» = «г», то комбинация аддитивная, если «в» больше, то синергидная,, если «в» меньше, то антагонистическая (а также если меньше,, чем активность одного наиболее эффективного вещества). Отклонение на 2,0 или меньше указывает на случайное отклонение или неточность методики эксперимента.
На рисунке 24.4 приведенные данные, как и у Фишера [!],. представлены в виде гистограммы, показывающей различие между графами «в» и «г», так как она более наглядно показывает степень синергизма (или антагонизма) каждой комбинации антибиотиков для каждого штамма.
Антибиотики с широким спектром активности, хорошо абсорбирующиеся после перорального и парентерального введения, не обладающие токсичностью, находят широкое применение в ветеринарии. Поскольку ветеринарные врачи встречаются с самыми разнообразными бактериальными инфекциями у целого ряда видов как крупных, так и мелких животных, то в их практике возможный диапазон исследований по распределению препаратов в организме представляется довольно обширным.
порядком устанавливается период в течение нескольких дней, когда молоко от коров, получавших антибиотики, нельзя использовать, чтобы предохранить людей от потребления антибиотиков. Поэтому для молочного производства крайне необходим соответствующий метод лечения, позволяющий свести до минимума ежегодные потери молока.
За последние годы наметилась тенденция увеличения колиии-фекций в период лактации [4], что, видимо, связано со скученностью скота и плохими санитарными условиями.
coli, выделенных от здоровых животных, может быть связана с предшествующим применением антибиотиков в лечебных и профилактических целях [101]. При использовании конкретного препарата картина резистентности видна особенно четко. В странах, где при лечении телят широко применяли неомицин, частота появления резистентных к этому лекарству штаммов оказалась выше, чем в других, например в Швеции, где это лекарство использовали значительно реже [60, 112].
Против тифозной лихорадки применяют хлорамфеникол, однако появление резистентных S. typhi заставило ограничить его применение и начать использование ампициллина и септрина, т. е. тех препаратов, применение которых при данном заболевании до последнего времени не считалось достаточно эффективным [6]. Впоследствии штаммы 5. typhi с R-плазмидной резистентностью к хлорамфениколу были выделены в Индии, Вьетнаме и Таиланде [4].
coli R+, что является дополнительным доказательством фактической передачи R-фактора in vivo, а не в культуральной среде, использованной для их выявления. В таблице 27.3 приведены сравнительные результаты передачи R-фактора отдельным штаммам -салмонелл от хорошего донора in vitro (штамм Е. coli F17). Учитывая, что R-фактор чаще всего обнаруживается у S. typhimurium, не удивительно, что штаммы S. typhimurium оказались лучшими реципиентами среди салмонелл в этих опытах.
Но как учесть действие отдельных препаратов в составе парных или множественных комбинаций?
Степень бактерицидного действия может быть оценена так, как это предложили Джевитс и др. [136]. Мы можем подтвердить, что в случае синергизма справедливы три положения, высказанные Дэвисом и Севагом [71]:
1) концентрация комбинированного препарата должна быть ниже ингибирующей концентрации каждого из входящих в него веществ;
2) концентрация каждого препарата в комбинации никогда не должна быть выше ингибирующей концентрации каждого из них в отдельности;
3) в присутствии комбинации разных веществ развитие выживших микроорганизмов должно происходить независимо от того, содержат они или нет резистентную популяцию (и причем не за короткое время).
Рассматривая современное состояние вопроса, по-видимому, следует сделать очень краткий обзор результатов применения парных препаратов, иногда называемых как синергид-ные комбинации, которые в действительности являются дополняющими друг друга и использовались в различных целях.
Простейшей и наверняка наименее синергидной является комплементация двух антибиотиков, которая в половинной от МИК каждого препарата концентрации оказывает такое же действие, как ингибирующая концентрация каждого из них по отдельности.
Совместное применение этих препаратов исключительно эффективно уничтожает всю или почти всю огромную популяцию энтерококков. Причина состоит в том, что стрептомицин, потенциально летальный для микроорганизмов, не проявляет своего максимального действия, так как может быть отделен от своей мишени на рибосоме стрептококков относительно непроницаемой клеточной стенкой. При одновременном действии на бактерию стрептомицина и пенициллина клеточная стенка разрушается и стрептомицин получает возможность проникать внутрь клетки и проявить свое летальное действие.
для обоих препаратов, соответствует такому соотношению, при котором препараты присутствуют в пропорции, отвечающей их индивидуальным М.ИК, определенным по отдельности [1, 20]. Например, если МИК ТМП составляет 1 мкг/мл, а СМЗ — 20 мкг/мл, то оптимальное соотношение будет 1 : 20, но вследствие широкой вариабельности в чувствительности микроорганизмов к ТМП и СМЗ указанное оптимальное соотношение также непостоянно.
Механизм синергизма между пенициллинами и аминогликозидами неизвестен. Он может состоять в увеличении проникновения аминогликозидов в бактериальную клетку в присутствии пенициллина, который ингибирует синтез клеточной стенки, как это было предложено при объяснении действия комбинации пенн-циллин-г-аминогликозиды на энтерококки. Однако независимо от возможного механизма имеющиеся данные показывают, что комбинированное лечение может значительно повысить эффективность антибиотикотерапии инфекций, вызванных Ps.
Пока непонятно клиническое значение взаимодействия мециллинама с другими р-лактамными антибиотиками, однако установленное в лаборатории явление представляет значительный интерес.
Совершенно другим примером синергизма с участием пенициллинов, для которого механизм представляется совершенно ясным, является синергизм при конкурентном ингибировании 6-лактамаз. Указанный тип синергизма может быть продемонстрирован между парой р-лактамных антибиотиков.
Также широко распространено использование комбинаций карбенициллина и аминогликозидов для лечения инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями, в частности Ps. aeruginosa. Связано это с синергидным эффектом, который можно показать in vitro, что значительно труднее получить в клинических условиях. Применение в клинике р-лактамазных ингибиторов пока ограничено, хотя очевидно, что правильное использование этого принципа для получения синергидного эффекта при применении В-лактамных антибиотиков имеет большое клиническое значение.
Как микробиолог-специалист по производству сыра, в дальнейшем я буду рассматривать проблемы консервации продуктов только с точки зрения применения низина.
Структура и физико-химические свойства. Строение низина и его биосинтез бактериями были изучены в последнее десятилетие с помощью современных методов молекулярной биологии. Эти работы позволили глубже понять его состав и структуру [32, 33, 34, 35].
Действие низина зависит также от количества спор в среде.
споры от клетки; г — дальнейший рост вегетативной клетки; д — деление клетки.
В этой связи следует подчеркнуть важность поддержания необходимого уровня низина в системе при исследовании чувствительности спор к этому антибиотику. Низин не способен к прочному связыванию со спорами [147], однако по этому вопросу существует и противоположное мнение [124].
Определение ростовых факторов, стимулирующих биосинтез низина, было проведено на дешевой культу-ральной среде с сывороткой. Изучена также возможность использования панкреатиновых гидролизатов — отходов инсулинового производства, а также пепсиновых гидролизатов молочнокислых бактерий [3, 4, 5, 6, 7, 20, 21, 23, 105, 107, 133, 142].
Имеется ряд публикаций по получению и характеристике препаратов низина.
helveticus) или без резкого увеличения выработки низиназы (например, Str. thermophilus) до исключительно легкого получения заквасок из мезофильных бактерий.
Отобранные резистентные-к низину штаммы (два штамма Str. lactis, один Str. cremoris, один Str. diacetilactis, один L. casei и два Propionibacterium) вначале были испытаны в качестве закваски в полупроизводственных условиях.
Резистентными к низину считали такие штаммы, которые имели ряд свойств, существенных для последующего использования: а) способность к кислотообразованию (аналогично родительскому штамму) при содержании в среде около 300 ИЕ/мл низина; б) резистентность к низину в течение более чем 1 месяца; в) неспособность синтезировать низиназу.
Очевидно, есть смысл продолжить наблюдения за стрессовым действием голодания.
Хотя действие голодания приводит к восстанавливаемым повреждениям, однако систематическое изучение повреждений и гибели от
голодания не привело к однозначным результатам. Обладает ли вторичное воздействие защитной способностью или ускоряет гибель культуры от голодания, может определяться природой субстрата, лимитирующего рост данной культуры.
На рисунке 11.1 приведена зависимость между концентрацией свободной S02 и поглощением при оптимальной длине волны (620нм). Чтобы получить прозрачную надосадочную жидкость для определения в ней содержания SO2, клетки в конце лаг-фазы необходимо осадить центрифугированием.
Измерение рН производили с помощью стеклянного электрода рН-метра Пай-Уникам, который опускали в образцы среды, отобранные с образцами для измерения мутности.
Сделанные ими выводы об эффективности пенициллина зависели от частоты заболевания, величины стада и конкретной национальной политики в области профилактики заболеваний. Исследования, проведенные в Национальном институте племенного молочного скота в Центральной ветеринарной лаборатории в Англии в течение 60-х годов, а также в Корнелльском университете США, завершились серией статей, в которых была изложена программа профилактики маститов.
В то же время коммерческая необходимость в быстром восстановлении здоровья зараженного животного и его доли в продуктивности всего стада не допускает промедления в проведении лечебных мероприятий. Примером таких обстоятельств является выбраковка высокопродуктивных дойных коров при остром мастите.
Отсутствие клинических признаков не позволяет идентифицировать инфицирующий микроорганизм, хотя маститы подобного типа могут быть результатом заражения одной или несколькими разновидностями грамположительных или грамотрицательных бактерий.
Результаты лечения, полученные в одном хозяйстве, могут иметь критическое значение для распространения курса лечения на другие хозяйства, особенно при колибациллезе у телят, когда в течение интенсивного периода отела в зимний и весенний период чувствительность резистентных патогенов к антибиотику может варьировать еженедельно, о чем говорит регулярное определение чувствительности к антибиотикам.
Несмотря на постоянное требование ввести антибиотикотера-пию после первоначального обследования заболевшего животного, тем не менее ветеринарные практики хорошо понимают значение й необходимость тестов на чувствительность к антибиотикам.
Чувствительность постоянных и внесенных извне серо-типов Е. coli в этих условиях может изменяться настолько часто и так быстро, что любое подозрение на начало ухудшения клинической картины при новой вспышке должно указать на необходимость дополнительных тестов на чувствительность, чтобы предотвратить серьезные потери.
Периодические лабораторные исследования образцов от животных, нуждающихся в лечении, или образцов после вскрытия не указывают, что резистентность обнаруживаемых в хозяйствах патогенов не поддается воздействию доступными антибиотиками.
Мы рассматриваем антибиотики как слабую, но необходимую замену профилактики и хорошего содержания животных, хотя применяемые препараты никогда не исключают необходимости как профилактики, так и удовлетворительного содержания. Можно надеяться, что длительное применение антибиотиков не вызовет сомнения в их надобности, а их потенциальная вредность для людей и животных уменьшится, если антибактериальные вещества будут использоваться с ограничениями и под надежным контролем.
ИЗМЕНЕНИЕ СВОЙСТВ МИКРОФЛОРЫ ПОСЛЕ ПРОВЕДЕНИЯ АНТИБИОТИКОТЕРАПИИ
Как указано в обзоре Вилсона [48], в Англии в течение последних 6 лет отмечено увеличение у крупного рогатого скота резистентных к пенициллину стафилококков от 40 до 70 %. В Северной Ирландии на протяжении 10 лет мы проводили ежегодное тестирование по 500 изолятов и установили, что устойчивые к пенициллину стафилококки составляют от 80 до 90%.
Проблема слишком велика, и я намеренно избегал обсуждения преимуществ одного конкретного антибиотика против другого, учитывая их большое разнообразие и доступность. Сказанное справедливо и для проблемы осложнений, возникающих при оценке комбинаций лекарств, их дозировки и влияния лекарственных форм.
Определенное мнение, видимо, стоит высказать относительно' антибиотиков, которые легко связываются с тканями организма и белком.
Полевые опыты на большом числе крупного рогатого скота и свиней показывают [6], что применение комбинации триметоприма и сульфонамидов дает лучшие результаты, чем использование в повышенной дозировке одного сульфонамида; но поскольку триметоприм индивидуально испытан не был, то обнадеживающие результаты от применения комбинации препаратов могли быть отнесены за счет активности триметоприма. В связи с этим была предпринята попытка разработать экспериментальную модель инфекции скота штаммом Salmonella dublin, чтобы в контролируемых условиях эксперимента in vitro изучить явление синергизма между препаратами.
Уменьшилось количество случаев новых инфекций и маститов при отеле.
Результаты испытания опытных мазей, содержащих цефалоспорины, показали, что эти антибиотики имеют большое значение при лечении маститов. Кроме того, цефалоспориновые мази полностью отвечают требованиям, предъявляемым к интрацистернальным препаратам. Оба препарата были активны in vivo и in vitro против микроорганизмов, вызывающих маститы; они накапливаются в вымени в оптимальных концентрациях и удерживаются там достаточно долго.
Теперь мы получили возможность широкого выбора мазей с антибиотиками для лечения и предотвращения заболевания. По-видимому, следующим объектом нашего внимания должен стать вопрос: как наиболее оптимально применять эти препараты? Анти-биотикотерапия может приобрести особое значение при применении ее в условиях тщательной гигиены и соответствующей организации производства. В этих случаях антибиотики могут стать даже наиболее предпочтительным средством для профилактики маститов.
При анализе образцов кала от коров, которым скармливали цинк-бацитрацин, не было установлено различий в количестве высевающихся Е. coli из опытного и контрольного образцов. Штаммы Е. coli культивировали затем на агаре с цинк-бацитрацином и инкубировали в аэробных условиях в течение ночи при 37 °С. После негативного контрастирования бактерии исследовали методом электронной микроскопии. На агаровой среде без цинк-бацитра-цина клетки Е.
Ясно, что несостоятельность определения аддитивности, которое мы исследовали, вызвана тем обстоятельством, что основные кривые не являются прямолинейными. Более того, мы можем сказать, что обоснованное определение аддитивности можно дать лишь в том случае, если основные кривые будут иметь форму прямых линий. Одна из двух переменных, по которым строятся основные кривые, а именно та, которая строится по точкам на горизонтальной оси, соответствует массе используемого компонента.
Для каждой из пяти возможностей по нашему первому методу сравнения можно показать, что определения аддитивности, антагонизма и синергизма справедливы лишь при двух условиях, которые состоят в следующем.
1. Наибольшая из максимальных потенциальных активностей, достигаемая тремя конкурирующими веществами (двумя индивидуальными компонентами и их смесью), выбирается как стандартная.
2. Для препарата, будь это простой компонент или смесь, который никогда не достигает стандартной потенциальной активности, количество вещества, эквивалентное одной стоп-дозе, считается не установленным.
Затем на агар накладывали 4 диска одного и того же антибиотика с одинаковой концентрацией; на обратной стороне дисков наносили метку (рис. 24.3). Диски оставляли для равномерной диффузии
антибиотика в агар. Таким методом можно оценить максимум четыре комбинированных препарата в одной чашке.
К следующим 9 мл расплавленного агара при 48 °С добавляли 1 мл культуры Е. coli, перемешивали до гомогенного состояния и выливали в чашку, которую затем охлаждали.
24.3). Если «в» = «г», то комбинация аддитивная, если «в» больше, то синергидная,, если «в» меньше, то антагонистическая (а также если меньше,, чем активность одного наиболее эффективного вещества). Отклонение на 2,0 или меньше указывает на случайное отклонение или неточность методики эксперимента.
На рисунке 24.4 приведенные данные, как и у Фишера [!],. представлены в виде гистограммы, показывающей различие между графами «в» и «г», так как она более наглядно показывает степень синергизма (или антагонизма) каждой комбинации антибиотиков для каждого штамма.
Антибиотики с широким спектром активности, хорошо абсорбирующиеся после перорального и парентерального введения, не обладающие токсичностью, находят широкое применение в ветеринарии. Поскольку ветеринарные врачи встречаются с самыми разнообразными бактериальными инфекциями у целого ряда видов как крупных, так и мелких животных, то в их практике возможный диапазон исследований по распределению препаратов в организме представляется довольно обширным.
порядком устанавливается период в течение нескольких дней, когда молоко от коров, получавших антибиотики, нельзя использовать, чтобы предохранить людей от потребления антибиотиков. Поэтому для молочного производства крайне необходим соответствующий метод лечения, позволяющий свести до минимума ежегодные потери молока.
За последние годы наметилась тенденция увеличения колиии-фекций в период лактации [4], что, видимо, связано со скученностью скота и плохими санитарными условиями.
coli, выделенных от здоровых животных, может быть связана с предшествующим применением антибиотиков в лечебных и профилактических целях [101]. При использовании конкретного препарата картина резистентности видна особенно четко. В странах, где при лечении телят широко применяли неомицин, частота появления резистентных к этому лекарству штаммов оказалась выше, чем в других, например в Швеции, где это лекарство использовали значительно реже [60, 112].
Против тифозной лихорадки применяют хлорамфеникол, однако появление резистентных S. typhi заставило ограничить его применение и начать использование ампициллина и септрина, т. е. тех препаратов, применение которых при данном заболевании до последнего времени не считалось достаточно эффективным [6]. Впоследствии штаммы 5. typhi с R-плазмидной резистентностью к хлорамфениколу были выделены в Индии, Вьетнаме и Таиланде [4].
coli R+, что является дополнительным доказательством фактической передачи R-фактора in vivo, а не в культуральной среде, использованной для их выявления. В таблице 27.3 приведены сравнительные результаты передачи R-фактора отдельным штаммам -салмонелл от хорошего донора in vitro (штамм Е. coli F17). Учитывая, что R-фактор чаще всего обнаруживается у S. typhimurium, не удивительно, что штаммы S. typhimurium оказались лучшими реципиентами среди салмонелл в этих опытах.