В своем сообщении Шванновский комитет отметил соответствие цинк-бацитрацина, моеномицина и виргиниямицина этим требованиям. Можно ожидать, что со временем эти или, возможно, другие препараты заменят пенициллин, хлортетрациклин, окситетрацик-лин, эритромицин, тилозин и стрептомицин, используемые в настоящее время в разных странах в качестве добавки к корму животных. Несколько других компонентов также соответствовало требованиям Шванновского комитета, а именно: тиопептин, амфомицин и гаартрезин.
Проблема получила также графическую интерпретацию [137]. Еще раньше этому явлению было дано крайне усложненное толкование, исходя из 4-мерной природы [166]. В свою очередь, последнее было связано с первоначальным распределением препаратов на две группы [135]:
I — пенициллины, стрептомицин, неомицин — канамицин, бацит-рацин, полимиксины;
II — тетрациклины, хлорамфеникол, эритромицины, новобиоцин, сульфонамиды.
Специальным типом комплементации является использование пар или даже триплетов веществ для предотвращения распространения резистентности. Подобный подход привел к значительному успеху при лечении туберкулеза, в других случаях эффект был заметно ниже.
Истинно синергидной считается такая комбинация, когда эффект от использования пары веществ выше, чем при применении каждого препарата в отдельности, и даже при существенно больших концентрациях.
Существование указанных двух форм резистентности совершенно очевидно, если учесть распределение энтерококков по их устойчивости к стрептомицину. Эти микроорганизмы подразделяются на две группы: 1) чувствительные к 250 мкг/мл или менее стрептомицина и 2) резистентные к 1000 мкг/мл или более этого вещества [8]. Слабо резистентные и особенно чувствительные к стрептомицину микроорганизмы подвержены действию пенициллина, который способствует проникновению стрептомицина в клетку и проявлению синергидного действия.
Таким образом, с точки зрения фундаментальной микробиологии существуют многообещающие возможности. Очевидно, не меньший интерес будет представлять и уровень, до которого дойдет применение комбинаций антибиотиков в терапии.
Исследовательские лаборатории „Велном", США
Триметоприм (ТМП) — антибактериальное вещество, которое в комбинации с сульфонамидом широко применяется при лечении многих инфекционных заболеваний.
Бушби [18] исследовал 19 штаммов с разной степенью резистентности к СМЗ и установил, что после контакта их с обоими препаратами частота появления ТМП-резистентных мутантов зависит от степени резистентности к.сульфонамиду, причем в случае с более резистентными штаммами указанная зависимость была менее выраженной. Клиническое значение этих резистентных мутантов вызывает сомнения. Большинство из них образовывали необычно мелкие колонии, и многие проявляли антигенные различия, связанные с аутоагглютинацией.
Имеющиеся сообщения о синергизме комбинации ТМП + СМЗ,! который был установлен с помощью стандартных методов определения чувствительности сульфонамидрезистентных штаммов,, представляются противоречивыми; однако обнаруженный этими: методами отрицательный результат взаимного усиления препаратов в отношении данной культуры не обязательно исключает возможность синергизма in vivo. Подобная неудача может объясняться присутствием в среде нейтрализующих препараты веществ, либо использованием неподходящего соотношения концентраций ТМП—СМЗ.
Необходимо отметить, что хотя амоксициллин в данном случае, вероятно, и обладал слабой бактерицидной активностью против энтерококков, ее нельзя было обнаружить благодаря специфике примененного метода определения. В этом методе проявление бактерицидной активности может быть зарегистрировано только в том случае, если исходная величина, равная 106 клеток/мл, после контакта с препаратом уменьшится до менее чем 102 клеток/мл, т.
В присутствии белков разрушение низина под действием высоких температур менее выражено [147].
Все упомянутые свойства существенны для проявления активности низина в пищевых продуктах, подвергаемых термальной обработке при разных значениях рН. Поскольку низин обладает лишь слабой б а кте р и ци д но стыо и является скорее бактерио- или споростатическим соединением, то содержание его в обрабатываемых продуктах должно быть достаточно высоким.
По сравнению с родительскими штаммами они значительно более чувствительны к медицинским антибиотикам [100], а также к другим неблагоприятным факторам: сильному нагреванию, высокой концентрации соли и желчи в среде [90].
Питательная ценность продуктов, обработанных низином. Данных о питательной ценности продуктов, обработанных низином, крайне мало. Исследование обработанных низином несладкого сухого молока и эдамского сыра в сравнении с контрольными продуктами, кроме всего прочего, показало высокое содержание в них витаминов А, Вь В2 и С, сывороточных белков и свободных аминокислот [29, 31, 79, 123].
Из подробно рассмотренных публикаций вытекает необходимость изучения аналитических проблем низина, его стабильности при разной тепловой обработке и различном рН, а также вопросов синергизма и антибиоза. Эти публикации подтверждают некоторые выводы предыдущей Истеровской школы, а именно: необходимость включения низина в программу исследований по резистентности бактерий и спор, определение взаимосвязи между низином и истинной терморезистентностью спор, изучение стадий прорастания спор, на которых отражается действие низина, а также си-нергидного действия прогревания и низина на споры.
Этот прием нашел применение при подсчете поврежденных бактерий группы кишечной палочки [71]. Бактерии высевали на поверхность триптозного соевого агара, инкубировали 1—2 ч при температуре 25 °С и заливали желчным агаром с индикатором фиолетовым красным. Другие авторы использовали модификацию этого метода [34]. Бактерии группы кишечной палочки заливали в чашках основной средой того же состава, что и желчный агар с фиолетовым красным, но без желчи и- индикатора.
Применение лизоцима позволяет сделать поправку на восстанавливаемое тепловое повреждение [7, о].
Известные методы подсчета обычно непригодны для определения числа поврежденных микроорганизмов, так как при этом селективная среда содержится в пробирках. Если для определения поврежденных бактерий группы кишечной палочки использовать эти методы, то для этого необходимо использовать элективную среду в пробирках.
10.6) составляла 5,3, через 3 дня она начала увеличиваться и к 9-му дню достигла 6,3. Количество стафилококков начало возрастать через сутки при значении рН 5,3. Таким образом, в обоих сырах, начиная с рН 5,3, происходило размножение стафилококков. Невосприимчивость микроорганизмов к реакции среды в сыре установлена при рН 5,5—5,8 [13].
ВЛИЯНИЕ КАЗЕИНОЛИЗИСА
На величину рН среды оказывают влияние не только основная микрофлора, но и стафилококки, которые отличаются друг от друга по скорости кислотообразования и способности изменять рН среды за счет казеинолизиса.
Скорость роста может влиять на чувствительность к холодовому шоку, а бедная питательная среда — определять чувствительность к мембранноактивным веществам или к шоку при низких температурах [62]. Сходные факторы влияют на устойчивость к химическим веществам [104]. Особенно сильное влияние на данные полученных результатов оказывают характер, тяжесть и условия стрессового воздействия, а также вид селективной, питательной среды, использованной для подсчета уцелевших микроорганизмов (см.
Все эти препараты отвечают критериям Шванновского комитета и могут добавляться в корм или воду без особого разрешения ветеринарных органов. Не лишне заметить, что все фермеры, использующие стимуляторы роста, должны знать йх недостатки и не должны рассматривать такие препараты как панацею, поскольку при постоянном использовании стимуляторы роста могут маскировать более серьезные вирусные или микоплазменные инфекции.
В целом клеточная стенка грамположительных микроорганизмов представляет собой открытую фиброзную структуру, доступную для проникновения различных молекул.
Эти бактерии имеют очень сложную оболочку, состоящую по меньшей мере из пяти слоев. Самым внутренним слоем является цитоплазматическая мембрана, расположенная непосредственно под слоем пептидогликанов. В отличие от грамположительных •бактерий в данном случае пептидогликаны не содержат тейхое-вых кислот, вместо этого здесь имеется комплекс пептидогликанов с молекулами липопротеинов, образующий наружные тяжи.
Кроме того, обработанное кислотой зерно способствует лучшей усвояемости кормов и соответственно лучшему использованию протеина. Обработанное зерно лучше поедается животными, чем сухое, которое может причинять множество неудобств из-за своей пыльности.
Как было установлено в 1933 г.. Byssochlamys fulva может вызвать гниение термически обработанных фруктов [4]. Такой же вред часто приносит и Byssochlamys nivea [7].
Для предотвращения токсического действия реагентов их лучше разводить до меньшей концентрации, чем отделять от микроорганизмов центрифугированием. Остаточная уксусная кислота снижает рН среды примерно до 4,0, что в последующем подавляет рост бактерий.
Примечательно, что для активации изученных аскоспор необходима высокая концентрация реагентов. Для активации аскоспор Neurospora также использовали высокие концентрации органических растворителей.
На рисунке 25.2 приведены полученные результаты, из которых видно, что в течение 8 ч после введения в различных частях пищеварительного тракта отмечается значительная концентрация амоксициллина.
Задержка амоксициллина в толстой кишке отражает время прохождения препарата через кишечник. Пик концентрации амоксициллина в сыворотке отмечается через 2—4 ч и совпадает с высокими концентрациями препарата в тонком кишечнике через 3 ч после введения.
За резистентностью к ампициллину следовала резистентность к хлорамфениколу, неомицину и фуразолидону.
Резистентность к последним четырем препаратам обнаруживалась менее часто и была более характерна для изолятов от телят.
большинство из них несет по одной, две или три R-детерминанты, некоторые, штаммы Е. coli от телят и свиней несут до шести детерминант, устойчивости, :
Из этих наблюдений ясно, что общим свойством штаммов, выделенных от телят, свиней и птицы, является не только высокий процент резистентности к лекарству, но более того, каждый резервуар богат разными типами R-детерминант.
В Англии за период с 1961 г. по декабрь 1964 г. — февраль 1965 г. установлено значительное возрастание резистентности к антибиотикам Salmonella typhimurium, 61 % из 450 изученных штаммов S. typhimurium оказались резистентными к одному и более антибиотикам. Среди резистентных штаммов было идентифицировано до 18 фаготипов и обнаружено как минимум 14 типов резистентности к антибиотикам. Отдельные штаммы были резистентными не менее чем к пяти антибиотикам: ампициллину, стрептомицину, тетрациклину, хлорамфениколу, неомицину и сульфонамидам.
е. системы, предусматривающей совместное содержание большого числа их при поступлении из разных хозяйств, в которых широко применялись антибиотики для борьбы с падежом, в частности, от салмонеллеза. Приведенные факты, а также результаты опытов на свиньях и цыплятах, которых содержали на рационе с антибиотиками, и другие данные (см. обзор Смита [25] и приложение к сообщению-Американского комитета по ресурсам [37]) вместе с учетом опасности возможного распространения открытой к тому времени передаваемой резистентности — все эти обстоятельства послужили главной причиной создания в 1968 г.
В своем сообщении Шванновский комитет отметил соответствие цинк-бацитрацина, моеномицина и виргиниямицина этим требованиям. Можно ожидать, что со временем эти или, возможно, другие препараты заменят пенициллин, хлортетрациклин, окситетрацик-лин, эритромицин, тилозин и стрептомицин, используемые в настоящее время в разных странах в качестве добавки к корму животных. Несколько других компонентов также соответствовало требованиям Шванновского комитета, а именно: тиопептин, амфомицин и гаартрезин.
Проблема получила также графическую интерпретацию [137]. Еще раньше этому явлению было дано крайне усложненное толкование, исходя из 4-мерной природы [166]. В свою очередь, последнее было связано с первоначальным распределением препаратов на две группы [135]:
I — пенициллины, стрептомицин, неомицин — канамицин, бацит-рацин, полимиксины;
II — тетрациклины, хлорамфеникол, эритромицины, новобиоцин, сульфонамиды.
Специальным типом комплементации является использование пар или даже триплетов веществ для предотвращения распространения резистентности. Подобный подход привел к значительному успеху при лечении туберкулеза, в других случаях эффект был заметно ниже.
Истинно синергидной считается такая комбинация, когда эффект от использования пары веществ выше, чем при применении каждого препарата в отдельности, и даже при существенно больших концентрациях.
Существование указанных двух форм резистентности совершенно очевидно, если учесть распределение энтерококков по их устойчивости к стрептомицину. Эти микроорганизмы подразделяются на две группы: 1) чувствительные к 250 мкг/мл или менее стрептомицина и 2) резистентные к 1000 мкг/мл или более этого вещества [8]. Слабо резистентные и особенно чувствительные к стрептомицину микроорганизмы подвержены действию пенициллина, который способствует проникновению стрептомицина в клетку и проявлению синергидного действия.
Таким образом, с точки зрения фундаментальной микробиологии существуют многообещающие возможности. Очевидно, не меньший интерес будет представлять и уровень, до которого дойдет применение комбинаций антибиотиков в терапии.
Исследовательские лаборатории „Велном", США
Триметоприм (ТМП) — антибактериальное вещество, которое в комбинации с сульфонамидом широко применяется при лечении многих инфекционных заболеваний.
Бушби [18] исследовал 19 штаммов с разной степенью резистентности к СМЗ и установил, что после контакта их с обоими препаратами частота появления ТМП-резистентных мутантов зависит от степени резистентности к.сульфонамиду, причем в случае с более резистентными штаммами указанная зависимость была менее выраженной. Клиническое значение этих резистентных мутантов вызывает сомнения. Большинство из них образовывали необычно мелкие колонии, и многие проявляли антигенные различия, связанные с аутоагглютинацией.
Имеющиеся сообщения о синергизме комбинации ТМП + СМЗ,! который был установлен с помощью стандартных методов определения чувствительности сульфонамидрезистентных штаммов,, представляются противоречивыми; однако обнаруженный этими: методами отрицательный результат взаимного усиления препаратов в отношении данной культуры не обязательно исключает возможность синергизма in vivo. Подобная неудача может объясняться присутствием в среде нейтрализующих препараты веществ, либо использованием неподходящего соотношения концентраций ТМП—СМЗ.
Необходимо отметить, что хотя амоксициллин в данном случае, вероятно, и обладал слабой бактерицидной активностью против энтерококков, ее нельзя было обнаружить благодаря специфике примененного метода определения. В этом методе проявление бактерицидной активности может быть зарегистрировано только в том случае, если исходная величина, равная 106 клеток/мл, после контакта с препаратом уменьшится до менее чем 102 клеток/мл, т.
В присутствии белков разрушение низина под действием высоких температур менее выражено [147].
Все упомянутые свойства существенны для проявления активности низина в пищевых продуктах, подвергаемых термальной обработке при разных значениях рН. Поскольку низин обладает лишь слабой б а кте р и ци д но стыо и является скорее бактерио- или споростатическим соединением, то содержание его в обрабатываемых продуктах должно быть достаточно высоким.
По сравнению с родительскими штаммами они значительно более чувствительны к медицинским антибиотикам [100], а также к другим неблагоприятным факторам: сильному нагреванию, высокой концентрации соли и желчи в среде [90].
Питательная ценность продуктов, обработанных низином. Данных о питательной ценности продуктов, обработанных низином, крайне мало. Исследование обработанных низином несладкого сухого молока и эдамского сыра в сравнении с контрольными продуктами, кроме всего прочего, показало высокое содержание в них витаминов А, Вь В2 и С, сывороточных белков и свободных аминокислот [29, 31, 79, 123].
Из подробно рассмотренных публикаций вытекает необходимость изучения аналитических проблем низина, его стабильности при разной тепловой обработке и различном рН, а также вопросов синергизма и антибиоза. Эти публикации подтверждают некоторые выводы предыдущей Истеровской школы, а именно: необходимость включения низина в программу исследований по резистентности бактерий и спор, определение взаимосвязи между низином и истинной терморезистентностью спор, изучение стадий прорастания спор, на которых отражается действие низина, а также си-нергидного действия прогревания и низина на споры.
Этот прием нашел применение при подсчете поврежденных бактерий группы кишечной палочки [71]. Бактерии высевали на поверхность триптозного соевого агара, инкубировали 1—2 ч при температуре 25 °С и заливали желчным агаром с индикатором фиолетовым красным. Другие авторы использовали модификацию этого метода [34]. Бактерии группы кишечной палочки заливали в чашках основной средой того же состава, что и желчный агар с фиолетовым красным, но без желчи и- индикатора.
Применение лизоцима позволяет сделать поправку на восстанавливаемое тепловое повреждение [7, о].
Известные методы подсчета обычно непригодны для определения числа поврежденных микроорганизмов, так как при этом селективная среда содержится в пробирках. Если для определения поврежденных бактерий группы кишечной палочки использовать эти методы, то для этого необходимо использовать элективную среду в пробирках.
10.6) составляла 5,3, через 3 дня она начала увеличиваться и к 9-му дню достигла 6,3. Количество стафилококков начало возрастать через сутки при значении рН 5,3. Таким образом, в обоих сырах, начиная с рН 5,3, происходило размножение стафилококков. Невосприимчивость микроорганизмов к реакции среды в сыре установлена при рН 5,5—5,8 [13].
ВЛИЯНИЕ КАЗЕИНОЛИЗИСА
На величину рН среды оказывают влияние не только основная микрофлора, но и стафилококки, которые отличаются друг от друга по скорости кислотообразования и способности изменять рН среды за счет казеинолизиса.
Скорость роста может влиять на чувствительность к холодовому шоку, а бедная питательная среда — определять чувствительность к мембранноактивным веществам или к шоку при низких температурах [62]. Сходные факторы влияют на устойчивость к химическим веществам [104]. Особенно сильное влияние на данные полученных результатов оказывают характер, тяжесть и условия стрессового воздействия, а также вид селективной, питательной среды, использованной для подсчета уцелевших микроорганизмов (см.
Все эти препараты отвечают критериям Шванновского комитета и могут добавляться в корм или воду без особого разрешения ветеринарных органов. Не лишне заметить, что все фермеры, использующие стимуляторы роста, должны знать йх недостатки и не должны рассматривать такие препараты как панацею, поскольку при постоянном использовании стимуляторы роста могут маскировать более серьезные вирусные или микоплазменные инфекции.
В целом клеточная стенка грамположительных микроорганизмов представляет собой открытую фиброзную структуру, доступную для проникновения различных молекул.
Эти бактерии имеют очень сложную оболочку, состоящую по меньшей мере из пяти слоев. Самым внутренним слоем является цитоплазматическая мембрана, расположенная непосредственно под слоем пептидогликанов. В отличие от грамположительных •бактерий в данном случае пептидогликаны не содержат тейхое-вых кислот, вместо этого здесь имеется комплекс пептидогликанов с молекулами липопротеинов, образующий наружные тяжи.
Кроме того, обработанное кислотой зерно способствует лучшей усвояемости кормов и соответственно лучшему использованию протеина. Обработанное зерно лучше поедается животными, чем сухое, которое может причинять множество неудобств из-за своей пыльности.
Как было установлено в 1933 г.. Byssochlamys fulva может вызвать гниение термически обработанных фруктов [4]. Такой же вред часто приносит и Byssochlamys nivea [7].
Для предотвращения токсического действия реагентов их лучше разводить до меньшей концентрации, чем отделять от микроорганизмов центрифугированием. Остаточная уксусная кислота снижает рН среды примерно до 4,0, что в последующем подавляет рост бактерий.
Примечательно, что для активации изученных аскоспор необходима высокая концентрация реагентов. Для активации аскоспор Neurospora также использовали высокие концентрации органических растворителей.
На рисунке 25.2 приведены полученные результаты, из которых видно, что в течение 8 ч после введения в различных частях пищеварительного тракта отмечается значительная концентрация амоксициллина.
Задержка амоксициллина в толстой кишке отражает время прохождения препарата через кишечник. Пик концентрации амоксициллина в сыворотке отмечается через 2—4 ч и совпадает с высокими концентрациями препарата в тонком кишечнике через 3 ч после введения.
За резистентностью к ампициллину следовала резистентность к хлорамфениколу, неомицину и фуразолидону.
Резистентность к последним четырем препаратам обнаруживалась менее часто и была более характерна для изолятов от телят.
большинство из них несет по одной, две или три R-детерминанты, некоторые, штаммы Е. coli от телят и свиней несут до шести детерминант, устойчивости, :
Из этих наблюдений ясно, что общим свойством штаммов, выделенных от телят, свиней и птицы, является не только высокий процент резистентности к лекарству, но более того, каждый резервуар богат разными типами R-детерминант.
В Англии за период с 1961 г. по декабрь 1964 г. — февраль 1965 г. установлено значительное возрастание резистентности к антибиотикам Salmonella typhimurium, 61 % из 450 изученных штаммов S. typhimurium оказались резистентными к одному и более антибиотикам. Среди резистентных штаммов было идентифицировано до 18 фаготипов и обнаружено как минимум 14 типов резистентности к антибиотикам. Отдельные штаммы были резистентными не менее чем к пяти антибиотикам: ампициллину, стрептомицину, тетрациклину, хлорамфениколу, неомицину и сульфонамидам.
е. системы, предусматривающей совместное содержание большого числа их при поступлении из разных хозяйств, в которых широко применялись антибиотики для борьбы с падежом, в частности, от салмонеллеза. Приведенные факты, а также результаты опытов на свиньях и цыплятах, которых содержали на рационе с антибиотиками, и другие данные (см. обзор Смита [25] и приложение к сообщению-Американского комитета по ресурсам [37]) вместе с учетом опасности возможного распространения открытой к тому времени передаваемой резистентности — все эти обстоятельства послужили главной причиной создания в 1968 г.